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SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量60000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（pI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，pI=6.0～6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

组分	规格
封闭液用血清	12mL
生物素化二抗(抗人/大鼠/小鼠/山羊/兔IgG)	12mL
SABC-AP	12mL
20×BCIP/NBT	1mL
水溶性封片剂	12mL

保存：2～8℃，避免冷冻，有效期1年。

• 粘片剂APES或POLY-L-LYSINE。
  
• 0.01M TBS（pH7.2～7.6）配法：1000mL蒸馏水中加氯化钠9g，Tris 1.2g，乙酸450μL
  
• 0.01M TBS（pH9.0～9.5）配法：1000mL蒸馏水中加氯化钠9g，Tris 1.2g
  
• 0.01M枸橼酸盐缓冲液：1000mL蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g，枸橼酸(C6H8O7·H2O) 0.4g

用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。

• A程序：石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
  
• B程序：石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
  
• C程序：石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
  
• D程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。

• 石蜡切片热修复抗原染色程序：
  
  • 载玻片防脱片剂处理：可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58～60℃30-60分以使切片紧密粘附。
    
  • 切片常规脱蜡至水。
    
  • 热修复抗原：将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2～7.6）洗涤1～2次。
    
  • 滴加正常兔血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，不洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗（兔IgG），37℃ 1小时左右或20℃时2小时左右，也可4℃过夜。0.01MPBS（pH7.2～7.6）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
    
  • 滴加生物素化二抗IgG，37℃ 20分钟。0.01M PBS（pH7.2～7.6）洗2分钟×3次。
    
  • 滴加试剂SABC-AP，20～37℃ 20分钟。0.01M PBS（pH7.2～7.6）洗5分钟×4次。水洗1次。
    
  • 显色：BCIP/NBT用0.01M TBS（pH9.0.2-9.5）按1∶20的比例稀释，混匀后加至切片。20～37℃显色10～30分钟，镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。
    
  • 核固红轻度复染。水洗，干燥后水溶性封片剂封片（水溶性封片剂应加温至60℃左右），显微镜观察。
• 石蜡切片酶消化程序：
  以下面的步骤代替A程序中的第3步：滴加复合消化液（南京建成有售）5～10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。
  
• 石蜡切片不消化/不修复程序：
  对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第3步即可。
  
• 血涂片，细胞和冰冻切片染色程序：
  
  • 载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。
    
  • 固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定30分钟。
    
  • 3%冰乙酸室温浸泡20分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1～2次。其余步骤和石蜡切片4～9步相同。如果冰冻切片直接染色结果不理想时，可以参照石蜡切片对切片进行热修复，方法和石蜡切片3～9步相同。

相关搜索：即用型SABC-AP免疫组化试剂盒(适用人/大鼠/小鼠/山羊/兔中一种)，SABC-AP immunohistochemistry kit